«ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХИМИЯ УДК 340.67:343.612.1:615.276 ИЗОЛИРОВАНИЕ НИМЕСУЛИДА ИЗ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА В качестве изолирующ его агента ...»

124 НАУЧНЫ Е ВЕДО М ОСТИ С е р и я М е д и ц и н а. Ф а р м а ц и я. 2 01 2. № 2 2 (1 4 1 ). В ы п у с к 20/1

ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХИМИЯ

УДК 340.67:343.612.1:615.276

ИЗОЛИРОВАНИЕ НИМЕСУЛИДА ИЗ БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

В качестве изолирующ его агента для извлечения нимесулида

B.К. ШОРМАНОВ

из биологического материала предложен ацетон. Определены оп­

Д.А. ГЕРАСИМОВ тимальные условия изолирования нимесулида из ткани печени C.Г. ГАЛУШКИН трупа человека ацетоном и дана количественная оценка результа­ тов изолирования.

Курский государственный Ключевые слова: нимесулид, изолирование, судебно­ медицинский химический анализ, ТСХ, спектрофотометрия.

e-mail: r-wladimir@yandex.ru Введение. Нимесулид (4-нитро-2-феноксифенилметансульфонамид) - нестероидное противовоспалительное средство, проявляющее анальгезирующую, жаропонижающую и про­ тивовоспалительную активность. Нимесулид является основным действующим веществом пре­ паратов Нимулид, Нимесил, Найз, Актасулид и др. Его фармакологические эффекты широко используются при лечении различных патологий суставов, а также болях различного генеза.

Нимесулид по химической структуре является веществом, относящимся к производ­ ным соединений нитроанилиновой структуры. По физическим свойствам он представляет собой кристаллы от слабо-желтого до желтого цвета, хорошо растворимые в этаноле, ацето­ нитриле, диметилформамиде, ацетоне, хлороформе и ограниченно растворимые в гексане и воде [2, 5, 12].

Данное лекарственное вещество обладает значительной токсичностью для теплокров­ ных организмов. LD50 для крыс составляет от 163 мг/кг при внутрибрюшинном введении и от 200 мг/кг при пероральном введении. Для мышей LD50 составляет от 216 мг/кг при внутри­ брюшинном введении и от 392 мг/кг при пероральном введении [12].

В доступной литературе встречается описание многочисленных случаев отравления лю­ дей нимесулидом, в том числе и с летальным исходом [7, 8, 10, 15-17]Кроме этого, зарегистрированы случаи острых отравлений теплокровных животных (собаки, кошки, крысы) [9, 13-14].

Широкое применение нимесулида в качестве лекарственного средства, его токсичность и наличие случаев летального отравления обусловливают необходимость изучения этого со­ единения в химико-токсикологическом отношении [1].

Вопросы химико-токсикологического анализа данного вещества остаются недостаточно изученными. Существующие методики изолирования и определения нимесулида и близких по структуре соединений в биологическом материале обладают недостаточно высокой экспрессностью и сел<

–  –  –

Изучали особенности изолирования нимесулида из биологического материала рас­ творителями различной химической природы: водой и водными растворами кислот и щело­ чей (0,1 н. раствор гидроксида натрия, 8% раствор уксусной кислоты), карбоновыми кислотами (ледяная уксусная кислота), сложными эфирами карбоновых кислот (уксусный ангидрид), кетонами (ацетон), спиртами (метанол, этанол, пропанол-1, пропанол-2, бутанол-1, изобутанол), гетероциклическими кислородсодержащими соединениями (диоксан), алканами (гексан), галогеналканами (метиленхлорид, хлороформ, 1,2-дихлорэтан, тетрахлорметан), а также аренами (бензол, толуол, о-ксилол), сложными и простыми эфирами (диэтиловый эфир, этилацетат, пропилацетат, бутилацетат), нитрилами (ацетонитрил).

Для этого готовили модельные смеси исследуемого вещества и мелкоизмельченной трупной печени человека, которые выдерживали при 18-200С в течение 1,5 часа после их приго­ товления.

Осуществляли двукратное изолирование нимесулида при соотношении изолирующе­ го агента и биологического материала 2:1 (по массе). Продолжительность каждого настаивания составляла 45 минут. Оба извлечения, полученные из каждой модельной смеси, объединяли, отфильтровывали на фильтре, предварительно промытом изолирующим агентом, и часть объе­ диненного извлечения наносили на пластины ВЭТСХ типа «Сорбфил» с люминесцентным ин­ дикатором и хроматографировали, используя подвижную фазу толуол-ацетонитрил в соотно­ шении (7:3) в присутствии вещества-свидетеля. На хроматограммах нимесулид обнаруживался в виде тёмного пятна с желтоватой окантовкой на более светлом общем фоне пластины в УФсвете и в виде светло-жёлтого пятна в видимом свете. Значение Rf составляло 0,74±0,03. Элюи­ рование нимесулида из сорбента осуществляли диметилформамидом. Количество анализируе­ мого вещества определяли методом спектрофотометрии при аналитической длине волны рав­ ной 439,4 нм. Расчеты осуществляли по уравнению калибровочного графика.

С помощью описанной выше схемы изолирования, очистки и определения нимесулида исследовали зависимость величины степени извлечения рассматриваемого вещества из биоло­ гического материала от продолжительности контакта изолирующей жидкости с биологическим материалом, кратности настаивания и количественного соотношения изолирующего агента и биологической ткани.

Изучалась зависимость степени извлечения нимесулида оптимальным изолирующим агентом от концентрации анализируемого соединения в биологическом объекте. В каждом слу­ чае 25,00 г мелко измельченной трупной печени человека, содержащей определенное количе­ ство нимесулида (от 2,50 до 50,00 мг), заливали 50 г ацетона и выдерживали в течение 45 ми­ нут при периодическом перемешивании. Извлечение сливали с твердого остатка, а процесс на­ стаивания повторяли по описанной выше схеме. Отдельные извлечения объединяли и от­ фильтровывали на фильтре, предварительно промытом ацетоном. 0,3 мл полученного фильт­ рата наносили на хроматографическую пластину ВЭТСХ «Сорбфил» с люминесцентным инди­ катором в виде полосы и осуществляли хроматографирование в присутствии веществасвидетеля в стеклянной камере объемом 600 см3, используя в качестве элюента систему раство­ рителей толуол-ацетонитрил (7:3). Участок хроматограммы с анализируемым веществом выре­ зали и элюировали вещество 5 мл диметилформамида в течение 15 минут. Оптическую плот­ ность элюата измеряли на СФ-2000 в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм при аналитиче­ ской длине волны равной 439,4 нм. В качестве фона использовали элюат, полученный в кон­ трольном опыте. Количественное содержание рассматриваемого вещества рассчитывали с по­ мощью уравнения калибровочного графика.

Результаты исследования и их обсуждение.

В данном случае уравнение калибро­ вочного графика имело вид:

A = 0,07482 • C - 0,0003123,

где A - оптическая плотность; С - концентрация, мкг/мл;

Результаты зависимости изолирования нимесулида из трупной печени от природы изо­ лирующего агента представлены на рис. 1.

Сравнение результатов изолирования показало, что наибольшая степень извлечения достигается при использовании в качестве изолирующего агента ацетона.

Установлено, что максимальная степень извлечения нимесулида из трупной печени ацетоном достигается при продолжительности настаивания не менее 45 минут (рис. 2).

Исследование зависимости степени извлечения нимесулида от кратности настаивания показало, что для достаточно полного извлечения рассматриваемого вещества из трупной печени необходимо двукратное настаивание биологического Рис. 1. Зависимость степени извлечения (R, %) нимесулида из ткани печени от природы изолирующ его агента (двукратное изолирование, соотношение изолирующ его агента и биологического материала 2:1 (по массе) НАУЧНЫ Е ВЕДО М ОСТИ С е р и я М е д и ц и н а. Ф а р м а ц и я. 2 01 2. № 2 2 (1 4 1 ). В ы п у с к 20/1

–  –  –

84,06 50,0 2,04 3,02 0,91 2,54 2,09 25,0 83,89 0,93 2,59 3,09 83,66 2,65 12,5 2,13 0,95 3,17 83,58 5,0 2,92 1,05 2,35 3,49 1,21 2,5 83,35 2,71 3,37 4,04 Использование в качестве изолирующего агента ацетона и предложенные условия изоли­ рования позволяют достичь достаточно высокой степени извлечения анализируемого вещества из ткани печени трупов. Открываемый минимум составляет 0,5 мг нимесулида в 100 г биологическо­ го материала. Предложенная методика достаточно хорошо воспроизводима, отличается простотой выполнения, не требует применения сложной аппаратуры и значительных затрат времени на вос­ произведение. Она может быть использована в практике при проведении экспертизы в случае от­ равления нимесулидом.

Выводы:

1. Изучена возможность использования ацетона в качестве изолирующего агента при хи­ мико-токсикологическом исследовании нимесулида.

2. Определены оптимальные условия изолирования нимесулида ацетоном из биологиче­ ского материала.

3. Дана количественная оценка изолирования ацетоном рассматриваемого вещества из мо­ дельных смесей с тканью печени.

Литература

1. Доброриз, А.М. Обнаружение нимесулида в биологическом материале / А.М. Доброриз // Судебно­ медицинская экспертиза. - 2009. - Т. 52, № 4. - С. 32-34.

2. Зайцева, А.С. Химико-токсикологическое исследование отдельных нитропроизводных анилина :

автореф. дис.... канд. фарм. наук (14.04.02) / А.С. Зайцева; Курск. КГМУ. - Курск, 2012. - 23 с.

3. Заздравных, Н.А. Изолирование и идентификация нимесулида в биологическом материале / Н.А. Заздравных, И.В. Стаценко, Л.Г. Воронкова // Актуальные вопросы судебной медицины и экспертной практики. - 2008. - № 13. - С. 75-78.

4. Особенности определения отдельны х нитропроизводных анилина в биологических объектах в тон­ ком слое обращ еннофазового сорбента / В.К. Ш орманов, А.С. Ш илова, Ю.А. Сухомлинов, Д.А. Герасимов // Сорбционные и хроматографические процессы. - 2011. - Т. 11, № 3. - С. 407-414.

5. Ш орманов, В.К. Сохраняемость нимесулида и его основных метаболитов в гнилостноразлагающ емся трупном материале / В.К. Ш орманов, Д.А. Герасимов, С.Г. Галуш кин, Л.Е. Сипливая // А к ту­ альные проблемы судебно-медицинской экспертизы : сб. тезисов науч.-практ. конф. с междунар. участием, г. Москва, 17-18 мая 2012 г. - М., 2012. - С. 271-273.

6. Ш орманов, В.К. Определение изомеров нитроанилина в тонком слое нормальнофазового сорбента / В.К. Ш орманов, Д.А. Герасимов, А.С. Ш илова // Биотехнология. Биомедицинская инженерия и технология современных социальных практик : сб. тр. Всерос. науч.-практ. конф. - Курск : КГМУ, 2009. - С. 171-174.

7. Effects o f the European restrictive actions concerning nim esulide prescription: a sim ulation study on hepatopathies and gastrointestinal bleedings in Italy / M. Venegoni, R. Da Cas, F. M enniti-Ippolito, J. Traversa // Ann. 1st. Super. Sanita. - 2010. - Vol. 46. - № 2. - P. 153-157.

НАУЧНЫ Е ВЕДО М ОСТИ С е р и я М е д и ц и н а. Ф а р м а ц и я. 2 01 2. № 2 2 (1 4 1 ). В ы п у с к 20/1

8. Fatal hepatotoxicity secondary to nim esulide / G. M erlani, M. Fox, H.P. Oehen et al. // Eur. J. Clin.

Pharmacol. - 2001. - № 57. - P. 321-326.

9. Hepatotoxicity studies o f nim esulide in litters o f rat / P.B. Patel, T.K. Patel, S. Patni, et al. // NJIRM. Vol. 2, № 1. - P. 16-21.

10. Lithim poisoning and the use o f nim esulide / M. Bocchia, G. Bertola, D. M organti et al. // Recenti Prog.

Med. - 2001. - Vol. 92, № 7-8. - P. 462.

11. N ew ultra-violet spectrophotom etric m ethod for the estim ation o f nim esulide / S. Chandran, S. Saggar, K.P. Priya, R.N. Saha // Drug Dev. Ind. Pharm. - 2000. - Vol. 26, № 2. - P. 229-234.

12. Nim esulide sc-200623: M aterial safety data sheet // Santa Cruz biotechnology (Canada). - Santa Cruz:

CHEM W ATCH, 2010. - 10 р.

13. Nim esulide toxicity in dogs / N. Ramesh, K. Jayakum a, K. Narayana et al. / / Ind. J. Pharmacol. - 2001. P. 217-218.

14. Nim esulide-induced acute biliary tract injury and renal failure in a kitten: a case report / M.K.Borku, M. Guzel, M.C. Karakurun et al. / / V eterinarni Medicina. - 2008. - Vol. 53, № 3, P. 169-172.

15. Nim esulide-induced acute hepatitis / E. Cholongitas, D. Coulenti, K. Petraki, G.V. Papatheodoridis // Annals o f Gastroenterology. - 2003. - Vol. 16, № 4, P. 359-362.

16. Nim esulide-induced hepatotoxicity and fatal hepatic failure / H.H. Tan, W.M.C. Ong, S.H. Lai, W.C. Chow // Singapore Med. J. - 2007. - Vol. 48, № 6, P. 582-585.

17. Schattner, A. Fatal hepatitis and renal failure during treatm ent w ith nim esulide / A. Schattner, N. Soko­ lovskaya, J. Cohen // J. Int. M edicine. - 2000. - № 247. - P. 153-155.

–  –  –